来自不同领域的PIPPI科学家正在开发方法,工具和数据库,以指导合理配制强大的蛋白质疗法。他们的总体目标是开发一个数据库来指导产品配方的开发。
动态光散射(DLS)是用于高通量聚集筛选的主要生物物理技术,PIPPI广泛使用。
在接受News-Medical和Life Sciences的采访时,Lorenzo Gentiluomo详述了用于评估稳定性的各种DLS方法,包括一些新颖的应用。他还解释了DLS等高吞吐量技术的发展如何极大地增加了查找数据模式的机会以及机器学习在此过程中的作用。
你能解释光散射在PIPPI研究中的作用吗?
PIPPI联盟正在编制一个包含18种代表性蛋白质的数据库,以表征成功配方开发的关键属性。它将包括24种配方的基本特征,作为盐浓度和pH的函数。此外,一些配方将进行更深入的分子表征,其中蛋白质的结构特性与溶液行为有关。
这项工作的一个重要部分是使用动态光散射(DLS)和静态光散射(SLS)研究蛋白质 - 蛋白质相互作用。我们使用Wyatt的DynaPro Plate Reader测量蛋白质相互作用,该读数器具有温度控制的微孔板。
DynaPro Plate Reader可以对蛋白质的大小,分子量和相互作用进行DLS和SLS测量,从而很好地理解蛋白质制剂的物理稳定性。可以确定尺寸,分子量,多分散性,粘度和相互作用参数,然后确定配方条件和温度。
我们通过遵循平移扩散系数kD的浓度依赖性,使用DLS测量蛋白质 - 蛋白质相互作用。通过同时测量SLS,我们还可以确定成对分子间相互作用的强度,即第二维里系数A2或B22。这提供了一种对胶体稳定性配方进行分级的好方法。
有两种理论用于描述成对蛋白质 - 蛋白质分子间相互作用。我更喜欢使用接近能量框架,即反映距离依赖性的势能差异。增加离子强度可以屏蔽电荷 - 电荷相互作用,并且应该提供更快的聚集,因为分子更容易相互作用。
扩散相互作用参数kD已经表明它是配方的关键生物物理特性;它不仅是蛋白质相互作用的衡量标准。最近对抗体制剂的kD测量揭示了kD与制剂的表观溶解度,热稳定性,流变学和静电性质之间的关系。
标签:性蛋白质
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