【凝胶层析原理】凝胶层析是一种基于分子大小差异进行分离的色谱技术，广泛应用于生物大分子如蛋白质、核酸等的纯化与分析。其核心原理是利用不同孔径的凝胶颗粒对样品中各组分的渗透能力不同，从而实现物质的分离。
一、凝胶层析的基本原理总结
凝胶层析又称凝胶过滤层析或排阻层析（Gel Filtration Chromatography），其基本原理是根据分子的大小和形状，在通过凝胶颗粒时表现出不同的扩散速度。小分子可以进入凝胶颗粒内部，而大分子则被排除在外，因此在流动相中移动的速度不同，最终实现分离。
该方法的关键在于选择合适的凝胶介质，其孔径决定了可分离的分子范围。常用的凝胶包括Sephadex、Sephacryl、Superdex等，每种凝胶适用于特定的分子量范围。
二、凝胶层析原理简要对比表
| 特性 | 描述 |
| 原理 | 基于分子大小差异进行分离 |
| 分离机制 | 大分子被排阻，小分子进入凝胶孔内 |
| 凝胶类型 | Sephadex、Sephacryl、Superdex 等 |
| 分子量范围 | 取决于所选凝胶类型（如Sepharose 6B适合1000-50000 Da） |
| 流动相 | 通常为缓冲液，pH值和离子强度需根据目标物质调整 |
| 洗脱顺序 | 大分子先洗脱，小分子后洗脱 |
| 应用领域 | 蛋白质、多糖、核酸等生物大分子的纯化与分析 |
三、应用与注意事项
凝胶层析操作简便、重复性强，适用于实验室规模的样品处理。但需要注意以下几点：
- 凝胶的选择：应根据目标分子的大小选择合适孔径的凝胶。
- 流速控制：流速过快可能导致分辨率下降。
- 样品体积：样品体积不宜过大，否则可能影响分离效果。
- 柱床高度：较高的柱床有助于提高分辨率。
通过合理设计实验条件，凝胶层析能够有效实现复杂混合物中目标成分的高效分离与纯化，是生物化学与分子生物学研究中不可或缺的工具之一。