伊利诺伊大学香槟分校的研究人员开发了一种基于质谱的新型筛选技术
可快速分析酵母中产生的中链脂肪酸-大量游离脂肪酸的一部分,游离脂肪酸是必需营养素,肥皂,工业化学品和燃料。他们还确定了七个新的酿酒酵母基因工程突变体,这些突变体可产生更高水平的那些脂肪酸。
这项研究在《生物技术与生物工程》杂志上发表的一篇论文中有详细介绍。这项研究是由美国能源部资助的生物能源研究中心高级生物能源与生物产品创新中心(CABBI)进行的,由两位U of I教授:化学与生物分子工程(ChBE)教授赵慧敏和乔纳森(Jonathan) Sweedler,化学教授,化学学院院长。主要作者是赵雪博士在CABBI实验室的ChBE博士生Pu Xue(如图)。
赵的研究小组对酵母细胞进行了基因改造,以增加脂肪酸,生物柴油的关键成分,脂肪醇,蜡和烯烃的产量,这些脂肪酸是洗涤剂,胶粘剂和塑料的基础。CABBI的目标是开发强大的酵母,将可再生的植物生物质转化为燃料和化学品,以环保,可持续的方式替代石油基化学制造工艺。
薛说,科学家们可以建立一个庞大的工程酵母菌株或突变体库,从而快速产生各种MCFA。但是它们控制这些微生物细胞工厂中生产的MCFA的确切成分的能力是有限的,没有快速分析大量样品的“高通量”方法。
为了克服这一限制,Xue和其他研究人员与Sweedler小组合作开发了一种高通量筛选工具,这是一种基于MALDI-ToF MS(矩阵辅助激光解吸/电离飞行时间质谱)的化学表征方法。质谱法是一种通过测量复杂离子的质荷比来分析复杂样品的信息丰富的方法。在载玻片上的酵母菌落上发射激光;该仪器可测量酵母中脂质的分子量,从而能够识别它们。
现有的大多数检测或分析游离脂肪酸的方法都依赖于更为复杂的气相色谱或液相色谱-质谱法(被认为是金标准方法)。但是,这些方法在处理大量变化时会受到限制,并且准备样品既费时又费力。
使用MALDI-ToF MS系统的整体方法更快,并且已成功用于蛋白质和多肽。ToF质量分析仪快速,成本相对较低,并且具有较大的检测窗口,非常适合筛选复杂的生物目标。
但是中链脂肪酸挥发性高,重量轻,因此很难用这种方法检测和定量。此外,酵母的厚细胞壁对研究人员有效地分解细胞成分提出了另一个挑战。
因此,CABBI研究人员使用各种溶剂和基质优化了样品制备步骤。他们没有尝试直接检测MCFA,而是使用了一个代理:酵母细胞中的膜脂。他们假设,较短的酰基链磷脂酰胆碱(PCs)是一类磷脂,其膜脂质水平的升高将与产生MCFA的能力更高相关,MCFA的长度比酿酒酵母中常见的丰富脂肪酸短。
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