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一、时间分辨荧光免疫分析仪
(一)原理
属于非均相荧光免疫测定,镧系元素属于三价稀土离子,包括铕(Eu3+),钐(Sm3+),铽(Tb3+),钕(Nd3+)和镝(Dys+)等,它们的荧光寿命较长,尤其是Eu3+和Tb3+的荧光寿命特别长且荧光强。因此,时间分辨荧光免疫测定中多用Eu3+和Tb3+为标志物。以镧系元素(尤其是铕(Eu3+))标记抗原或抗体作为示踪物,它的激发光谱带较宽,发射光谱带窄,来自生物样品的荧光干扰少。激发光谱和发射光谱之间的位移大,能有效地分开激发光和发射的荧光。
(二)分析物解离增强原理
被镧系元素标记的抗体或抗原形成IC在弱碱性反应液中经激发后的荧光信号较弱,必须再加入增强液,使IC的pH降低至2~3,以利于Eu3+从复合物上解离,游离的Eu3+与另一种螯合剂结合,形成高强度荧光的稳定螯合物,又将该技术称为解离增强镧系元素荧光免疫(DELFIA),这是目前在时间分辨荧光免疫分析中应用最多的一种分析系统。
(三)注意事项
1.TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染,使本底升高,所用试剂和器材应尽量防尘。
2.载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板,其荧光本底低。
二、荧光偏振免疫分析仪
荧光偏振免疫测定(FPIA)为一种均相荧光免疫测定方法,荧光强度与荧光标志物质在溶液中旋转的速度与分子大小成反比,分子大,转动速度慢,荧光强度大;分子小,转动速度快,荧光强度小。常采用抗原抗体竞争反应原理,适用于小分子半抗原(如药物浓度)的检测。
第四节 自动化酶联免疫分析系统
ELISA能够测定传染病标志物、肿瘤标志物、骨代谢标志物和内分泌激素等许多项目。
全自动酶联免疫分析仪中的连体机工作速度快,自动化程度高,适合大批量样本的处理,如血站系统。
分体机,加样速度快,适合试验项目变化多、样本批量不等的临床实验室。
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