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(1)电解质：抗原和抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为pH 3～5和pH 5～6，在中性或:弱碱性的环境中，表面均带负电荷，适当浓度的电解质会使他们失去一部分负电荷而相互结合，出现肉眼可见的凝集或沉淀现象：在抗原抗体反应中，常用0.85%的NaCI溶液或各种缓冲液作为抗原、抗体的稀释液，以提供适当浓度的电解质。
(2)温度：抗原抗体反应必须在适宜的温度中进行，一般为15～40℃，通常最适为37℃。一定范围内，温度升高，可促进抗原抗体分子问的碰撞机会，加速抗原抗体复合物的形成，加快可见反应的速度，若温度高于56℃，可导致已结合的抗原抗体再解离，甚至或破坏;温度越低，结合速度越慢，但结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反应，对反应温度有特殊要求，如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。
(3)酸碱度：抗原抗体反应必须在合适的酸碱度环境中进行，pH过高或过低都将影响抗原:抗体的理化性质，抗原抗体反应的最适酸碱度为pH 6～8。此外，当pH达到或接近颗粒性抗原的等电点时，即使没有相应抗体存在时，也会引起抗原非特异性凝集，即自凝，造成假阳性反应，严重影响试验的可靠性 。
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